Netiesioginiai mikoorganimzų populiacijos augimo skaičiavimai

https://superfund.arizona.edu/highlights/ua-srp-investigators-are-party-new-44-million-grant

Ne visada reikia skaičiuoti mikrobines ląsteles, kad būtų įvertintas jų skaičius. Moksle ir pramonėje mikroorganizmų skaičius ir aktyvumas gali būti nuspręstas taikant netiesioginius metodus.

Drumstumas

Atliekant kai kuriuos eksperimentus, patogus metodas yra drumstumo nustatymas. Šis metodas leidžia nustatyti bakterijų augimą. Kai bakterijos dalijasi skystoje terpėje, dėl didėjančio ląstelių skaičiaus terpė tampa drumsta. 

Drumstumui matuoti yra naudojamas prietaisas, kuris vadinamas spektrofotometru (arba kolonimetru). Spektrofotometre šviesos spindulys pro bakterijų suspensiją yra perduodamas šviesai jautriam davikliui. Kai bakterinių ląstelių skaičius didėja, mažiau šviesos pasieks daviklį. Šį šviesos pasikeitimą prietaisas fiksuos kaip pralaidumo procentą. Prietaiso skalėje taip pat bus parodyta ir logaritminė išraiška, vadinama absorbcija (arba optinis tankis OT (OD – optical density), kuris skaičiuojamas Abs = 2 – log pralaidomu procentas). Absorbcija yra naudojama nustatant bakterijų augimą. Kai bakterijos yra logaritminėje augimo arba nykimo stadijoje, absorbcijos nuo laiko priklausomybė atrodys kaip tiesė. Jei absorbcijos rodmenys sutampa su tos pačios kultūros skaičiavimu lėkštelėse, ši koreliacija galės būti naudojama tolimesniuose bakterijų skaičiaus nustatymuose, gautuose naudojant drumstumą.

Kad pamatytume pirmuosius drumstumo pėdsakus, turi būti daugiau nei milijonas ląstelių mililitre. Kad spetrofotometras galėtų atlikti matavimą, mėginyje turi būti apie 10-100 milijonų ląstelių mililitre. Taigi, drumstumo matavimas yra netaikytinas nustatant ląstelių skaičių mėginiuose, kuriuose yra nedidelis ląstelių skaičius.

Metabolinis aktyvumas

Kitas būdas, leidžiantis netiesiogiai nustatyti bakterijų skaičių, yra populiacijos metabolinio aktyvumo matavimas. Šis metodas remiasi tuo, kad tam tikro susidariusio produkto, pvz., CO2 ar rūgšties, kiekis yra tiesiogiai proporcingas bakterijų skaičiui (logiška, kuo daugiau bakterijų, tuo daugiau produkto).

Sausas svoris

Filamentinių bakterijų ir grybelių ląstelių skaičiavimui įprasti metodai yra netinkami. Jei aktinomicetų ir grybelių skaičiavimui naudosime lėkštelių metodą, tai suskaičiuosime sporų skaičių. Taigi, šis metodas netinka suskaičiuoti minėtų organizmų ląstelių skaičiui. Vienas iš tinkamų metodų yra matuoti sausą svorį. Šio proceso metu, grybeliai arba bakterijos yra atskiriamos nuo mitybinės terpės, filtruojamos (kad pašalintume nereikalingas medžiagas) ir išdžiovinami eksikatoriuje. Gauta masė yra pasveriama. 

http://milkgenomics.org/article/bacterial-count/

Šiuo įrašu baigiame "Mikrobų augimo" skyrelį. Toliau aptarsime mikrobinio augimo kontrolę.

Sekit ir dalinkitės. Nauji įrašai kiekvieną pirmadienį ir ketvirtadienį. Iki kito susitikimo :)

chekas

Informacijos šaltiniai:

• Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. “Microbiology. An Introduction”. 11th edition. p. 175-177